Integrin α3/ITGA3/CD49c Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421161-LAC

Itga3 codifica l’integrina α3 (ITGA3/CD49c), una subunità α che si associa alla β1 per formare il recettore della laminina α3β1, coordinando l’adesione cellula–matrice extracellulare e la segnalazione bidirezionale. Attraverso programmi di adesione focale e rimodellamento del citoscheletro, ITGA3 influenza la migrazione cellulare, la polarità e l’organizzazione della membrana basale, integrando segnali che convergono sull’attività delle vie FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK. Nei tessuti murini, l’integrina α3 è ampiamente coinvolta nella dinamica di cellule epiteliali ed endoteliali, inclusi il rimodellamento associato alle ferite e lo sviluppo degli organi, e l’alterazione della segnalazione di ITGA3 è spesso studiata in contesti di infiammazione, fibrosi tissutale e biologia dell’invasione tumorale.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin α3/ITGA3/CD49c (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Itga3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin α3/ITGA3/CD49c (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Itga3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Integrin α3/ITGA3/CD49c. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Itga3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.