Integrin α3/ITGA3/CD49c Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400841-ACT

ITGA3 codifica l’integrina α3 (CD49c), una subunità α che forma l’eterodimero α3β1 per mediare l’adesione cellula–matrice extracellulare, in particolare alle laminine delle membrane basali. Attraverso l’accoppiamento ai complessi di adesione focale, ITGA3 regola il rimodellamento del citoscheletro, la polarità cellulare e la migrazione direzionale, integrando segnali dalle vie FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK che determinano programmi di sopravvivenza e motilità. L’integrina α3β1 contribuisce anche all’organizzazione dell’epitelio e all’integrità della barriera coordinando la segnalazione dipendente dall’adesione e il crosstalk con i recettori dei fattori di crescita. Una deregolazione dell’espressione di ITGA3 e alterazioni della segnalazione delle integrine sono state associate a invasività aberrante e comportamento metastatico in molteplici contesti tumorali, nonché a processi di riparazione epiteliale compromessi in condizioni infiammatorie e fibrotiche.

Integrin α3/ITGA3/CD49c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α3/ITGA3/CD49c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α3/ITGA3/CD49c. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α3/ITGA3/CD49c nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α3/ITGA3/CD49c nelle cellule tumorali con espressione di ITGA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.