Integrin β2/ITGB2/CD18 Plasmide Double Nickase (h): sc-400921-NIC

ITGB2 codifica l’integrina β2 (CD18), una subunità recettoriale di adesione a espressione ristretta ai leucociti che si associa a catene α (ad es. ITGAL/CD11a, ITGAM/CD11b, ITGAX/CD11c) per formare le integrine β2, che controllano il traffico delle cellule immunitarie e le funzioni effettrici. Questi eterodimeri regolano l’adesione stabile all’endotelio, la migrazione transendoteliale e la formazione della sinapsi immunologica attraverso segnali outside-in e inside-out collegati al rimodellamento del citoscheletro, alla dinamica delle adesioni focali e a vie associate a MAPK/PI3K. Le interazioni dipendenti da CD18 con i ligandi della famiglia ICAM coordinano il reclutamento di neutrofili e linfociti durante l’infiammazione e modulano i programmi di fagocitosi e burst ossidativo. Alterazioni genetiche o funzionali di ITGB2 sono associate a difetti di adesione leucocitaria e a risposte infiammatorie alterate, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio dei meccanismi di difesa dell’ospite e di disregolazione immunitaria.

Integrin β2/ITGB2/CD18 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.