Integrin α11/ITGA11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402541-ACT

ITGA11 codifica l’integrina α11, una subunità α che si associa con β1 per formare un recettore legante il collagene, coinvolto in modo rilevante nell’adesione cellula–matrice extracellulare e nella meccanotrasduzione. L’integrina α11/β1 sostiene il rimodellamento del collagene, la migrazione dei fibroblasti e l’organizzazione del microambiente stromale, collegando l’interazione con la matrice alla dinamica del citoscheletro e a vie di segnalazione quali adesioni focali/FAK, chinasi della famiglia SRC e le cascate a valle MAPK e PI3K-AKT. Attraverso questi processi, ITGA11 contribuisce al rimodellamento tissutale e alle risposte fibrotiche, e la sua disregolazione è oggetto di studio in contesti che includono segnalazione stromale alterata e comportamento cellulare invasivo. La modulazione dell’espressione di ITGA11 è quindi utile per analizzare microambienti ricchi di collagene, la segnalazione dipendente dall’adesione e la plasticità fenotipica guidata dalla matrice.

Integrin α11/ITGA11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α11/ITGA11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α11/ITGA11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α11/ITGA11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α11/ITGA11 nelle cellule tumorali con espressione di ITGA11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.