Integrin α10/ITGA10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404080-ACT

ITGA10 codifica l’integrina α10, una subunità α legante il collagene che in genere si associa all’integrina β1 per formare un recettore di adesione di superficie cellulare, arricchito nelle linee cellulari mesenchimali come i condrociti. Collegando la matrice extracellulare al citoscheletro di actina, l’integrina α10 modula l’assemblaggio delle adesioni focali e le vie di meccanotrasduzione che coinvolgono la segnalazione FAK/SRC, le cascate MAPK a valle e la dinamica del citoscheletro regolata dalle GTPasi della famiglia Rho. Questi processi influenzano l’adesione, la migrazione e il rimodellamento della matrice extracellulare, rendendo ITGA10 rilevante per studi sulla biologia della cartilagine, lo sviluppo scheletrico e le interazioni tra cellule stromali e matrice. Alterazioni dell’adesione mediata dalle integrine e della segnalazione del collagene sono inoltre spesso investigate in contesti di fenotipi articolari degenerativi e di crosstalk tumore–stroma, in cui l’interazione con la matrice può plasmare programmi di invasività o sopravvivenza.

Integrin α10/ITGA10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α10/ITGA10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α10/ITGA10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α10/ITGA10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α10/ITGA10 nelle cellule tumorali con espressione di ITGA10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.