Integrin β1/ITGB1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421171-ACT

Il gene murino *Itgb1* codifica l’integrina β1 (ITGB1), una subunità recettoriale chiave per l’adesione che forma eterodimeri con diverse integrine α per mediare il legame con ligandi della matrice extracellulare quali fibronectina, collagene e laminine. Attraverso l’assemblaggio delle adesioni focali, ITGB1 coordina il rimodellamento del citoscheletro di actina e una segnalazione bidirezionale che integra le vie FAK/Src, PI3K–AKT, MAPK/ERK e delle GTPasi Rho per regolare migrazione, sopravvivenza, proliferazione e meccanotrasduzione. Le dinamiche di adesione dipendenti da ITGB1 influenzano le transizioni epitelio–mesenchimali, il comportamento delle cellule staminali/progenitrici, il traffico delle cellule immunitarie e l’organizzazione tissutale durante lo sviluppo e la riparazione. La deregolazione della segnalazione di ITGB1 e dell’interazione con la matrice è spesso studiata in modelli di fibrosi, infiammazione, neurobiologia e progressione tumorale, in cui programmi alterati di adesione e invasione rimodellano il controllo dello stato cellulare.

Integrin β1/ITGB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Itgb1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin β1/ITGB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Itgb1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Itgb1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin β1/ITGB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Itgb1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin β1/ITGB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin β1/ITGB1 nelle cellule tumorali con espressione di Itgb1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.