Integrin α1/ITGA1/CD49a Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401275-ACT

ITGA1 codifica l’integrina α1 (CD49a), una subunità α che si associa all’integrina β1 per formare il recettore del collagene/laminina α1β1 e mediare l’adesione tra cellula e matrice extracellulare (ECM). Questo recettore regola la segnalazione delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e vie a valle come FAK/Src, MAPK/ERK e PI3K-AKT, che influenzano migrazione, sopravvivenza e differenziamento. L’attività di ITGA1 contribuisce al rilevamento dell’ECM, alla meccanotrasduzione e al rimodellamento tissutale in contesti stromali e immunitari, inclusi microambienti ricchi di collagene. Una segnalazione deregolata dell’integrina α1 è stata associata a rimodellamento fibrotico, traffico di cellule infiammatorie e invasione tumorale in diversi modelli rilevanti per la malattia, in cui risultano alterate la composizione dell’ECM e la segnalazione mediata dall’adesione.

Integrin α1/ITGA1/CD49a Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α1/ITGA1/CD49a Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α1/ITGA1/CD49a. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α1/ITGA1/CD49a nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α1/ITGA1/CD49a nelle cellule tumorali con espressione di ITGA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.