Int-6 Plasmide Double Nickase (h2): sc-405759-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Int-6 Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Int-6 Double Nickase Plasmid (h2) e il Int-6 Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF3E. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Int-6 Antibody (A-11): sc-133251
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Int-6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405759-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’EIF3E umano (Int-6) codifica una subunità centrale del complesso del fattore di inizio della traduzione eucariotico 3 (eIF3), che contribuisce a coordinare il reclutamento della subunità ribosomiale 40S e a regolare l’avvio della traduzione, con effetti a valle sulla proteostasi e sulla progressione del ciclo cellulare. Int-6 è stato associato al crosstalk tra il controllo della traduzione e le vie di turnover proteico, incluse interazioni con il sistema ubiquitina–proteasoma, ed è studiato in contesti quali il rimodellamento della traduzione degli mRNA in risposta allo stress. Un’alterazione dell’espressione o della funzione di EIF3E è correlata a una deregolazione dei segnali di crescita ed è stata riportata in molteplici dataset legati al cancro, a supporto della sua utilità per indagare programmi di traduzione oncogenici e la stabilità del genoma. L’editing genetico di EIF3E consente studi meccanicistici sull’integrità del complesso eIF3, sulla traduzione selettiva degli mRNA e sulle dipendenze di specifiche vie di segnalazione in modelli cellulari umani, mediante approcci di knockout, knock-in o perturbazioni specifiche di dominio.
Int-6 Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF3E nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF3E. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF3E. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF3E interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.