Insulin II Plasmide Double Nickase (m): sc-421140-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Insulin II Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Insulin II Double Nickase Plasmid (m) e il Insulin II Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ins2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Insulin II Plasmide Double Nickase (m) | sc-421140-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Ins2** codifica l’**insulina II**, un ormone delle cellule β pancreatiche fondamentale per l’omeostasi del glucosio e il metabolismo anabolico. Dopo la secrezione stimolata dal glucosio, l’insulina attiva la segnalazione attraverso il recettore dell’insulina regolando le vie **PI3K–AKT** e **MAPK**, promuovendo l’assorbimento di glucosio, la sintesi di glicogeno, la lipogenesi e la soppressione della gluconeogenesi epatica. **Ins2** influenza inoltre la funzione e la sopravvivenza delle cellule β tramite le risposte allo stress del RE e la processazione della proinsulina all’interno della via secretoria. La disregolazione della produzione o della segnalazione insulinica è strettamente associata a fenotipi di malattie metaboliche, rendendo **Ins2** un bersaglio chiave per studi meccanicistici sulla regolazione del glucosio e sulla biologia delle cellule β.
Insulin II Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ins2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ins2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ins2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ins2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.