Inhibin β-A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402676-ACT

INHBA codifica la subunità umana beta-A dell’inibina, che può omodimerizzare formando l’activina A oppure eterodimerizzare con l’inibina alfa formando l’inibina A, modulatori chiave dell’endocrinologia riproduttiva e dell’omeostasi tissutale. La segnalazione activina/inibina coinvolge le vie della superfamiglia del TGF-β, in particolare programmi trascrizionali mediati da SMAD2/3 che regolano proliferazione e differenziamento cellulare, rimodellamento della matrice extracellulare e risposte infiammatorie. L’attività di INHBA è stata implicata nei processi di sviluppo e nella riparazione delle ferite, e un’espressione alterata è riportata in molteplici contesti patologici, inclusi fibrosi e rimodellamento del microambiente associato ai tumori. In quanto componente di un ligando secreto, la beta-A dell’inibina funge anche da nodo di collegamento tra la segnalazione paracrina e i cambiamenti dell’espressione genica a valle in diversi tipi cellulari.

Inhibin β-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di INHBA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Inhibin β-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus INHBA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione INHBA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Inhibin β-A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus INHBA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Inhibin β-A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Inhibin β-A nelle cellule tumorali con espressione di INHBA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.