IMPDH Plasmide Double Nickase (h): sc-403719-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IMPDH Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IMPDH Double Nickase Plasmid (h) e il IMPDH Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IMPDH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IMPDH Plasmide Double Nickase (h) | sc-403719-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IMPDH Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403719-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IMPDH1 codifica l’inosina monofosfato deidrogenasi, un enzima limitante della velocità nella biosintesi de novo dei nucleotidi della guanina che catalizza la conversione di IMP in XMP e contribuisce all’omeostasi del pool di GTP. Controllando la disponibilità di nucleotidi, IMPDH1 influenza la sintesi di DNA/RNA, la progressione del ciclo cellulare e l’adattamento metabolico, collegando il metabolismo delle purine ai programmi proliferativi e di risposta allo stress. Un’alterata attività di IMPDH1 è stata associata a fenotipi di degenerazione retinica e può modulare la sensibilità cellulare alle fluttuazioni della domanda di nucleotidi, rendendola rilevante per studi sulla regolazione metabolica e sul mantenimento del genoma.
IMPDH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IMPDH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IMPDH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IMPDH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IMPDH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.