IMPACT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421126

Panoramica

IMPACT (inositol monophosphatase domain containing 1) codifica una proteina citoplasmatica conservata implicata nel controllo della traduzione e nell’adattamento cellulare alla disponibilità di nutrienti. Nelle cellule dei mammiferi, IMPACT è stata associata alla modulazione della risposta integrata allo stress, inclusa la regolazione della via di eIF2α e dei programmi di traduzione indotti dallo stress che influenzano proliferazione e sopravvivenza in condizioni di stress metabolico. Attraverso queste connessioni, Impact viene studiato in contesti in cui la proteostasi e il sensing degli amminoacidi influenzano la funzione neuronale, lo sviluppo e la resilienza allo stress, offrendo un punto di accesso molecolare per esaminare come i checkpoint della traduzione contribuiscano a fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IMPACT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Impact in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Impact insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Impact a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IMPACT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Impact per lo studio della segnalazione di IMPACT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Impact critici per la funzione di IMPACT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Impact per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IMPACT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IMPACT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Impact. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IMPACT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IMPACT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Impact per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Impact definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.