IL-9 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421119-ACT

Il gene murino Il9 codifica l’interleuchina-9 (IL-9), una citochina pleiotropica prodotta prevalentemente dalle cellule Th9 e da altre popolazioni linfoidi attivate, che modula l’infiammazione di tipo 2 e le risposte immunitarie mucosali. L’IL-9 segnala attraverso il complesso recettoriale dell’IL-9 attivando le vie JAK/STAT, in particolare STAT5, promuovendo in modo dipendente dal contesto la sopravvivenza, la proliferazione e le funzioni effettrici nelle cellule bersaglio, quali mastociti, cellule T e compartimenti epiteliali. Questo asse contribuisce alla regolazione dell’immunità di barriera e dei circuiti infiammatori implicati nell’infiammazione delle vie aeree, nelle risposte allergiche e nella difesa antiparassitaria, e interagisce con reti citochiniche che coinvolgono IL-4, IL-13 e TGF-β. Un’attività deregolata di Il9 è pertanto spesso studiata in modelli di immunopatologia in cui il rimodellamento guidato dalle citochine e il reclutamento leucocitario sono processi chiave.

IL-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Il9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Il9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Il9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Il9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-9 nelle cellule tumorali con espressione di Il9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.