IL-9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403774-ACT

IL9 umano codifica l’interleuchina-9 (IL-9), una citochina pleiotropica prodotta dalle cellule T attivate, incluse le sottopopolazioni Th9, che contribuisce a plasmare le risposte immunitarie a livello delle barriere mucosali. L’IL-9 segnala attraverso il complesso recettoriale dell’IL-9, attivando le vie JAK/STAT, in particolare STAT5, e si integra con programmi più ampi guidati dalle citochine che influenzano la differenziazione dei linfociti, la biologia dei mastociti e la funzione delle cellule epiteliali. Un’attività deregolata dell’IL-9 è stata implicata in processi immunitari infiammatori e allergici e nella modulazione del microambiente tumorale–immunitario, rendendo IL9 un nodo utile per studiare le reti di citochine e il crosstalk tra cellule immunitarie e stroma. In vitro, l’IL-9 viene comunemente studiata per il suo impatto sugli stati di attivazione immunitaria, sui profili di secrezione citochinica e sui programmi trascrizionali a valle.

IL-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-9 nelle cellule tumorali con espressione di IL9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.