IL-6 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400390-LAC

IL6 umano codifica l’interleuchina-6 (IL-6), una citochina pleiotropica che coordina le risposte immunitarie innate e adattative regolando la segnalazione di fase acuta, il reclutamento dei leucociti e la differenziazione delle cellule B. IL-6 si lega a IL-6R e al co-recettore gp130 per attivare JAK/STAT3, oltre alle vie MAPK e PI3K-AKT, modulando programmi trascrizionali infiammatori e decisioni di sopravvivenza cellulare. Una segnalazione di IL-6 deregolata è associata a infiammazione cronica, patologie autoimmuni, biologia delle infezioni e infiammazione associata ai tumori, rendendo IL6 un nodo chiave per lo studio delle reti di citochine e del crosstalk immuno–stromale. In ambito di ricerca, IL6 viene comunemente analizzato per collegare segnali di stress extracellulari con l’espressione genica a valle guidata da STAT, il rimodellamento metabolico e gli stati funzionali delle popolazioni mieloidi e linfoidi.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-6 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IL6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-6 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IL6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IL-6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IL6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.