IL-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421112

Panoramica

Il5 codifica l’interleuchina-5 (IL-5), una citochina associata ai Th2 che coordina l’impegno di linea, la sopravvivenza e l’attivazione degli eosinofili, e nei topi supporta la proliferazione delle cellule B e lo switch di classe. L’IL-5 segnala attraverso il recettore dell’IL-5 (IL5RA con la catena β comune) attivando le vie JAK/STAT, MAPK e PI3K, modulando i programmi immunitari di tipo 2 e il traffico dei granulociti. Un’attività di IL-5 disregolata è collegata a infiammazione guidata dagli eosinofili e a risposte allergiche delle vie aeree, rendendo Il5 un nodo centrale per analizzare le reti citochiniche che controllano l’immunità mucosale. Nei modelli sperimentali, la perturbazione di Il5 viene utilizzata per studiare la differenziazione leucocitaria, i circuiti chemiotattici e il cross-talk tra citochine durante le risposte agli elminti e l’infiammazione allergica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Il5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Il5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Il5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Il5 per lo studio della segnalazione di IL-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Il5 critici per la funzione di IL-5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Il5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IL-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Il5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IL-5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Il5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Il5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.