IL-4I1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420354-ACT

Il4i1 codifica per IL-4I1, una L-amminoacido ossidasi secreta, prodotta prevalentemente da cellule mieloidi presentanti l’antigene, che modula l’attivazione immunitaria attraverso il metabolismo degli amminoacidi e la segnalazione ossidativa. Catalizzando amminoacidi come la fenilalanina, IL-4I1 può influenzare l’equilibrio redox e plasmare le risposte delle cellule T, integrandosi con vie che regolano la presentazione dell’antigene, la polarizzazione infiammatoria e il dialogo tra cellule immunitarie nei microambienti tissutali. Nei modelli murini, un’alterata espressione di Il4i1 è stata collegata a cambiamenti nella regolazione dell’immunità adattativa e può influenzare gli esiti sperimentali in contesti di infiammazione cronica e di interazioni tra tumore e sistema immunitario. Queste caratteristiche rendono IL-4I1 un nodo molecolare utile per studiare la regolazione immunometabolica e i meccanismi di immunosoppressione guidati dal microambiente.

IL-4I1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Il4i1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-4I1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Il4i1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Il4i1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-4I1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Il4i1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-4I1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-4I1 nelle cellule tumorali con espressione di Il4i1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.