IL-3Rα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421109
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IL-3Rα Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IL-3Rα, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IL-3Rα Antibody (C-5): sc-74522
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IL-3Rα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421109 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il3ra codifica la catena alfa del recettore dell’interleuchina-3 (IL-3Rα, CD123), che conferisce specificità di legame per il ligando e forma un complesso di segnalazione con la catena beta comune per trasdurre segnali dipendenti da IL-3. Nelle cellule ematopoietiche e immunitarie del topo, IL-3Rα regola proliferazione, sopravvivenza e differenziamento, attivando a valle le vie JAK/STAT, PI3K/AKT e MAPK che modulano le risposte della linea mieloide. Un’alterazione della segnalazione mediata da IL-3Rα può perturbare l’omeostasi guidata dalle citochine e i programmi infiammatori, rendendo Il3ra un bersaglio utile per studiare l’ematopoiesi, gli stati di attivazione mieloide e il cross-talk tra recettori delle citochine. Il recettore è inoltre ampiamente utilizzato come marcatore di immunofenotipizzazione per indagare lo sviluppo e l’eterogeneità funzionale nei diversi compartimenti ematopoietici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-3Rα (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Il3ra in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Il3ra insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Il3ra a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-3Rα.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Il3ra per lo studio della segnalazione di IL-3Rα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Il3ra critici per la funzione di IL-3Rα
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Il3ra per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IL-3Rα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IL-3Rα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Il3ra. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IL-3Rα Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IL-3Rα (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Il3ra per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Il3ra definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.