IL-28R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402530

Panoramica

IFNLR1 codifica la subunità alfa del recettore dell’interleuchina-28 (IL-28Rα), la componente di legame del ligando del complesso recettoriale dell’interferone di tipo III, che si associa a IL10RB per mediare le risposte all’IFN-λ (IL-28/IL-29). Il legame del recettore attiva la segnalazione JAK–STAT, promuovendo la formazione del complesso STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3) e l’induzione dei geni stimolati dall’interferone, che modellano l’immunità innata dei siti epiteliali e di barriera. L’espressione di IFNLR1 è arricchita nei tessuti epiteliali, contribuendo a una segnalazione antivirale e infiammatoria compartimentalizzata, distinta dalle vie dell’interferone di tipo I. Una segnalazione IFN-λ/IFNLR1 deregolata è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria mucosale e a una maggiore suscettibilità a fenotipi di malattie infiammatorie e infettive in ambito respiratorio e gastrointestinale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-28R (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IFNLR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IFNLR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IFNLR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-28R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IFNLR1 per lo studio della segnalazione di IL-28R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IFNLR1 critici per la funzione di IL-28R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IFNLR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-28R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IL-28R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IFNLR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-28R Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IL-28R (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IFNLR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IFNLR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.