IL-28R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402530-ACT

IFNLR1 codifica il recettore dell’interferone lambda 1 (IL-28Rα), la subunità legante il ligando del complesso recettoriale degli interferoni di tipo III, che si associa a IL10RB per mediare le risposte alle citochine della famiglia IFN-λ. Il legame al recettore attiva la segnalazione JAK/STAT, inducendo una trascrizione dei geni stimolati dall’interferone dipendente da STAT1/STAT2/IRF9, che modella le difese antivirali della barriera epiteliale e l’immunità delle mucose. L’attività di IFNLR1 influenza la programmazione dell’immunità innata, la presentazione dell’antigene e il tono infiammatorio nei tessuti ricchi di epitelio, collegando l’espressione del recettore alle variazioni nella restrizione antivirale e nella patologia mediata dal sistema immunitario. La disregolazione della segnalazione IFN-λ/IFNLR è stata studiata nel contesto della suscettibilità ai virus respiratori e gastrointestinali, dell’infiammazione cronica e delle interazioni tra tumore e sistema immunitario.

IL-28R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNLR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-28R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNLR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNLR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-28R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNLR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-28R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-28R nelle cellule tumorali con espressione di IFNLR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.