IL-28A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405375

Panoramica

IFNL2 codifica per l’interferone lambda 2 (IL-28A), un interferone di tipo III che segnala attraverso il complesso recettoriale IFNLR1/IL10RB per attivare le vie JAK–STAT e indurre i geni stimolati dall’interferone. Questa citochina sostiene la difesa antivirale epiteliale e mucosale e modula le risposte immunitarie innate e adattative plasmando la produzione di chemochine e la presentazione dell’antigene. L’attività di IL-28A interseca la segnalazione dei recettori di riconoscimento del patogeno, incluse le vie dei TLR e dei recettori tipo RIG-I, per coordinare programmi trascrizionali antivirali. La deregolazione della segnalazione di IFNL2 e la variabilità genetica sono state associate a esiti differenti nell’infezione virale e nei processi infiammatori, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulle interazioni ospite–patogeno e sulla regolazione immunitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-28A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IFNL2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IFNL2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IFNL2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-28A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IFNL2 per lo studio della segnalazione di IL-28A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IFNL2 critici per la funzione di IL-28A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IFNL2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-28A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IL-28A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IFNL2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-28A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IL-28A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IFNL2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IFNL2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.