IL-23 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-401374-LAC-2

L’IL23A umano codifica la subunità p19 dell’interleuchina‑23 (IL‑23), una citochina eterodimerica che si associa a IL12B (p40) per formare il complesso IL‑23, il quale segnala attraverso il recettore dell’IL‑23 attivando le vie JAK/STAT, in particolare STAT3, nelle cellule T e nelle popolazioni linfoidi innate. L’IL‑23 è un regolatore chiave dell’immunità di tipo 17: sostiene la differenziazione e il mantenimento delle cellule Th17 e promuove programmi effettori a valle che modellano la difesa della barriera mucosale e le reti di citochine infiammatorie. Una deregolazione della segnalazione IL23A/IL‑23 è stata implicata nell’infiammazione cronica mediata dal sistema immunitario, inclusi psoriasi, malattia infiammatoria intestinale e spondiloartrite, collegando questo asse all’infiammazione e al rimodellamento patogeni dei tessuti. Strumenti di editing genetico mirati a IL23A e di perturbazione funzionale sono ampiamente utilizzati per studiare l’assemblaggio della citochina, la segnalazione nelle cellule presentanti l’antigene e la dinamica dei circuiti IL‑23/Th17 in modelli cellulari e in studi di immunologia in vivo.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-23 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IL23A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-23 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IL23A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IL-23. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IL23A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.