IL-22 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403228-ACT

IL22 umano codifica l’interleuchina-22 (IL-22), una citochina prodotta principalmente dalle cellule Th17/Th22 e dalle cellule linfoidi innate, che segnala attraverso il complesso recettoriale IL-22R1/IL-10R2 nei compartimenti epiteliale e stromale. IL-22 attiva la via di segnalazione JAK/STAT, con programmi trascrizionali guidati in modo prominente da STAT3 che regolano l’integrità della barriera, l’espressione di peptidi antimicrobici, le risposte di fase acuta e i processi di riparazione tissutale. Attraverso il crosstalk con vie infiammatorie tra cui NF-κB e MAPK, IL-22 modula l’immunità mucosale in intestino, polmone e pelle. Un’attività di IL-22 deregolata è stata associata a disturbi infiammatori e a contesti di rimodellamento epiteliale, rendendola un nodo utile per studiare le risposte epiteliali guidate dalle citochine.

IL-22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-22 nelle cellule tumorali con espressione di IL22 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.