IL-1Rrp2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-430727-ACT

Il1rl2 codifica il recettore murino IL-1Rrp2, un membro della famiglia dei recettori dell’interleuchina-1 che contribuisce al rilevamento delle citochine e alla successiva segnalazione infiammatoria a valle. L’attivazione dei complessi recettoriali dell’IL-1 si interfaccia tipicamente con vie dipendenti da MyD88 per regolare i programmi trascrizionali di NF-κB e MAPK, plasmando le risposte immunitarie innate e adattative. L’espressione e la segnalazione mediata dai recettori della famiglia IL-1 influenzano l’attivazione dei leucociti, le risposte della barriera epiteliale e il rimodellamento tissutale durante l’infiammazione. La disregolazione delle reti di segnalazione correlate all’IL-1 è spesso studiata in modelli di infiammazione allergica, autoimmunità e infezione, in cui una responsività alle citochine alterata può modulare i fenotipi di malattia.

IL-1Rrp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Il1rl2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-1Rrp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Il1rl2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Il1rl2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-1Rrp2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Il1rl2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-1Rrp2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-1Rrp2 nelle cellule tumorali con espressione di Il1rl2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.