IL-1ra Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401313

Panoramica

IL1RN umano codifica l’antagonista del recettore dell’interleuchina-1 (IL-1ra), un regolatore secreto che inibisce in modo competitivo il legame di IL-1α e IL-1β al recettore dell’IL-1 di tipo I, attenuando così la segnalazione a valle dipendente da MyD88. Limitando l’attivazione di NF-κB e delle vie MAPK indotta da IL-1, IL-1ra modula programmi trascrizionali che controllano la produzione di citochine, il reclutamento dei leucociti e le risposte infiammatorie di fase acuta. Un’attività di IL1RN deregolata è associata a segnalazione innata aberrante e a set point infiammatori alterati, rendendolo rilevante per studi su autoinfiammazione, vie associate all’artrite e, più in generale, la regolazione delle reti citochiniche. IL1RN è anche utilizzato come nodo marcatore per interrogare la dinamica dell’asse inflammasoma–IL-1 e i meccanismi di controllo a feedback in macrofagi, cellule epiteliali e compartimenti stromali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1ra (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IL1RN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IL1RN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IL1RN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-1ra.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IL1RN per lo studio della segnalazione di IL-1ra, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IL1RN critici per la funzione di IL-1ra
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IL1RN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-1ra CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IL-1ra CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IL1RN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-1ra Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IL-1ra (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IL1RN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IL1RN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.