IL-17 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421092-ACT

Il gene murino **Il17a** codifica **IL-17A**, una citochina effettrice caratteristica delle cellule Th17 e di altri linfociti “innate-like”, che coordina il reclutamento dei neutrofili e la difesa antimicrobica nei tessuti di barriera. IL-17A segnala attraverso **IL-17RA/IL-17RC** attivando programmi trascrizionali dipendenti da **NF-κB**, **MAPK** e **C/EBP**, che inducono chemochine come **CXCL1/CXCL2** e mediatori infiammatori inclusi **IL-6** e **G-CSF**. Questa via si integra con le reti **IL-23–STAT3** e agisce in sinergia con **TNF** e con il signaling della famiglia **IL-1** per amplificare l’infiammazione tissutale. Un’attività disregolata di IL-17A è ampiamente utilizzata nei modelli murini per studiare circuiti infiammatori rilevanti per patologie di tipo autoimmune, immunobiologia mucosale e infiammazione associata ai tumori.

IL-17 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Il17a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-17 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Il17a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Il17a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Il17a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-17 nelle cellule tumorali con espressione di Il17a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.