IL-15Rα Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-421090-LAC-2

Il15ra nel topo codifica la subunità alfa del recettore dell’interleuchina-15 (IL-15Rα), una subunità di legame ad alta affinità che cattura l’IL-15 e ne consente la trans-presentazione ai complessi IL-2/15Rβ–γc sui linfociti responder, amplificando così la segnalazione JAK1/JAK3–STAT5. Attraverso questo meccanismo, IL-15Rα regola lo sviluppo, la sopravvivenza e l’attivazione delle cellule NK e delle cellule T CD8+ della memoria, e modella l’omeostasi immunitaria guidata dalle citochine durante l’infiammazione. Un’attività deregolata dell’asse IL-15/IL-15Rα è implicata nella patologia autoimmune e infiammatoria e nelle interazioni tra tumore e sistema immunitario tramite un’alterata funzione dei linfociti citotossici. Modelli murini con Il15ra editato e le cellule immunitarie da essi derivate vengono utilizzati per analizzare il traffico dei recettori delle citochine e la trans-presentazione, mappare i programmi trascrizionali a valle e valutare la regolazione immunitaria in microambienti rilevanti per infezioni, autoimmunità e cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-15Rα (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Il15ra in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-15Rα (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Il15ra, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IL-15Rα. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Il15ra e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.