IL-13 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402777-ACT

IL13 umano codifica l’interleuchina-13 (IL-13), una citochina di tipo 2 secreta che modella le risposte immunitarie segnalando attraverso IL-13Rα1/IL-4Rα per attivare JAK–STAT6 e i programmi trascrizionali a valle. L’IL-13 promuove la polarizzazione alternativa dei macrofagi, la metaplasia delle cellule caliciformi, la produzione di muco e l’attivazione dei fibroblasti, collegandola al rimodellamento tissutale e all’infiammazione delle barriere. In contesti ematopoietici ed epiteliali, l’IL-13 interagisce con le reti associate ai Th2 e può modulare la presentazione dell’antigene e l’espressione di chemochine. Una segnalazione di IL-13 deregolata è implicata nell’infiammazione allergica delle vie aeree, nell’asma, nella dermatite atopica e nei processi fibrotici, rendendo IL13 un nodo utile per studi meccanicistici dell’immunità di tipo 2.

IL-13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-13 nelle cellule tumorali con espressione di IL13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.