IL-12B p40 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401407-ACT

L’IL12B umano codifica la subunità p40 condivisa dalle citochine eterodimeriche IL-12 (p35/p40) e IL-23 (p19/p40), collocando IL12B come regolatore centrale della comunicazione immunitaria tra immunità innata e adattativa. La segnalazione dipendente da p40 attraverso i complessi recettoriali IL-12R e IL-23R attiva le vie JAK/STAT, modellando la polarizzazione Th1 e Th17, l’induzione dell’interferone-γ e le reti di citochine infiammatorie nelle cellule mieloidi e linfoidi. Alterazioni dell’espressione di IL12B o squilibri della via di segnalazione sono stati associati a una difesa dell’ospite deregolata e a fenotipi infiammatori cronici, rendendolo rilevante per studi sulla biologia delle infezioni, sull’infiammazione granulomatosa e sulla patologia immunitaria guidata da citochine. Questo gene è frequentemente analizzato in modelli di attivazione di macrofagi e cellule dendritiche e in sistemi di co-coltura che misurano la differenziazione dei linfociti T e la funzione effettrice.

IL-12B p40 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL12B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-12B p40 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL12B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL12B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-12B p40. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL12B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-12B p40 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-12B p40 nelle cellule tumorali con espressione di IL12B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.