IKKγ Plasmide Double Nickase (h): sc-400274-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IKKγ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IKKγ Double Nickase Plasmid (h) e il IKKγ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IKBKG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IKKγ Antibody (F-10): sc-166398
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IKKγ Plasmide Double Nickase (h) | sc-400274-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IKKγ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400274-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IKBKG codifica IKKγ (NEMO), la subunità regolatoria del complesso IKK che collega la segnalazione dei recettori a monte alla fosforilazione e alla degradazione delle proteine IκB, consentendo le risposte trascrizionali mediate da NF-κB. Attraverso input provenienti da TNFR, IL-1R/TLR, recettori dell’antigene e vie citosoliche di stress, IKKγ contribuisce a coordinare l’espressione dei geni infiammatori, la segnalazione immunitaria innata e adattativa, i programmi di sopravvivenza cellulare e le risposte al danno del DNA. L’alterazione di IKBKG compromette l’attivazione della via canonica di NF-κB e può modificare le reti citochiniche, la sensibilità all’apoptosi e l’omeostasi delle barriere/tessuti ectodermici. Varianti in IKBKG sono associate a fenotipi di immunodeficienza e displasia ectodermica, e una regolazione anomala di NF-κB è ampiamente rilevante per lo studio dei meccanismi delle malattie infiammatorie e della segnalazione oncogenica.
IKKγ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IKBKG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IKBKG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IKBKG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IKBKG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.