IKKβ Plasmide Double Nickase (h): sc-400247-NIC

IKBKB codifica IKKβ, il nucleo catalitico del complesso IKK che fosforila le proteine IκB per innescarne l'ubiquitinazione e la degradazione, consentendo la traslocazione nel nucleo dei fattori di trascrizione NF-κB. Attraverso questa via canonica di NF-κB, IKKβ integra segnali provenienti da recettori quali TNFR e TLR/IL-1R per coordinare l'espressione dei geni infiammatori, le risposte immunitarie innate, i programmi di sopravvivenza cellulare e l'adattamento allo stress. Un'attività deregolata di IKBKB è stata collegata alla segnalazione persistente di NF-κB osservata in contesti infiammatori e autoimmuni e, in biologia tumorale, dove può influenzare la proliferazione, la resistenza all'apoptosi e le reti citochiniche del microambiente. In quanto nodo centrale di segnalazione, IKKβ è spesso oggetto di studio per i suoi ruoli nella trascrizione guidata dalle citochine, nel crosstalk di via con MAPK e con le risposte interferoniche, e nelle modifiche del fosfoproteoma dipendenti dallo stimolo.

IKKβ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IKBKB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IKBKB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IKBKB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IKBKB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.