IKKβ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400247-ACT

IKBKB codifica IKKβ (IκB chinasi beta), una subunità catalitica del complesso IKK che fosforila le proteine IκB innescandone l’ubiquitinazione e la degradazione, consentendo ai fattori di trascrizione NF-κB di traslocare nel nucleo. Attraverso questo punto di controllo centrale, IKKβ regola la segnalazione immunitaria innata e adattativa, i programmi di citochine infiammatorie, la sopravvivenza cellulare e le risposte allo stress a valle di recettori quali TNFR, i TLR e IL-1R. Un’attività deregolata di IKBKB/IKKβ è associata all’attivazione aberrante della via di NF-κB osservata in diverse patologie infiammatorie e in molteplici contesti oncologici, rendendolo un nodo comune oggetto di studio nelle ricerche sulla trasduzione del segnale e sulle reti trascrizionali. Nei modelli cellulari umani, la modulazione dell’espressione di IKBKB è spesso utilizzata per esaminare il crosstalk con la segnalazione MAPK, l’apoptosi e le risposte allo stress metabolico.

IKKβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IKBKB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IKKβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IKBKB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IKBKB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IKKβ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IKBKB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IKKβ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IKKβ nelle cellule tumorali con espressione di IKBKB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.