IGFBP6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404768-ACT

IGFBP6 codifica per la proteina legante il fattore di crescita insulino-simile 6 (insulin-like growth factor binding protein 6), una glicoproteina secreta che lega preferenzialmente IGF-II e ne modula la biodisponibilità, l’interazione con i recettori e la segnalazione a valle attraverso vie quali PI3K–AKT e MAPK/ERK. Regolando segnali di crescita, sopravvivenza e differenziamento dipendenti da IGF, IGFBP6 contribuisce all’omeostasi tissutale e alle risposte allo stress cellulare in molteplici contesti d’organo. Un’espressione alterata di IGFBP6 è stata riportata in diversi ambiti di ricerca oncologica e metabolica, dove può influenzare fenotipi di proliferazione, migrazione e apoptosi associati a una segnalazione IGF disregolata. In quanto regolatore extracellulare solubile, IGFBP6 è inoltre studiata per il suo impatto sulla comunicazione paracrina nel microambiente tumorale e in modelli di biologia dello sviluppo ed endocrina.

IGFBP6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGFBP6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGFBP6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGFBP6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGFBP6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGFBP6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGFBP6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGFBP6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGFBP6 nelle cellule tumorali con espressione di IGFBP6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.