IGFBP5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400945-LAC

IGFBP5 (proteina legante il fattore di crescita insulino-simile 5) è un regolatore secreto e associato alla matrice extracellulare della segnalazione IGF, che modula la biodisponibilità e l’interazione con il recettore di IGF-I e IGF-II. Modellando l’output delle vie PI3K–AKT e MAPK/ERK guidate da IGF1R, IGFBP5 influenza proliferazione, sopravvivenza, migrazione e differenziamento cellulari, con ulteriori effetti indipendenti da IGF sull’adesione cellulare e sul rimodellamento della matrice. Nei tessuti umani, IGFBP5 è associata alla biologia mesenchimale e dei fibroblasti, a programmi osteogenici e a stati trascrizionali legati alla riparazione delle ferite, spesso in intersezione con la segnalazione TGF-β/SMAD e con l’organizzazione della ECM. Un’espressione deregolata di IGFBP5 è stata riportata in diversi microambienti fibrotici e associati ai tumori, rendendola un nodo utile per studiare la responsività ai fattori di crescita dipendente dal contesto e il rimodellamento dello stroma.

Le particelle di attivazione lentivirale IGFBP5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IGFBP5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IGFBP5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IGFBP5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IGFBP5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IGFBP5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.