IGFBP5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400945-ACT

IGFBP5 (proteina 5 legante il fattore di crescita insulino-simile, insulin-like growth factor binding protein 5) è una proteina secreta che lega gli IGF e modula la biodisponibilità e la segnalazione di IGF1/IGF2 attraverso l’asse IGF, influenzando l’attività delle vie PI3K–AKT e MAPK. Regolando la risposta ai fattori di crescita e le interazioni con la matrice extracellulare, IGFBP5 contribuisce al controllo della proliferazione, sopravvivenza, differenziazione e migrazione cellulari, nonché del rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’espressione di IGFBP5 sono state associate a cambiamenti nei programmi legati alla fibrosi, nella biologia dello stroma e nelle dinamiche del microambiente tumorale, rendendola un nodo utile per studiare la regolazione della crescita dipendente dal contesto. In quanto proteina umana con funzioni sia dipendenti sia indipendenti dagli IGF, IGFBP5 è spesso studiata nei pathway che governano la senescenza cellulare e le risposte dello sviluppo o al danno.

IGFBP5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGFBP5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGFBP5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGFBP5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGFBP5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGFBP5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGFBP5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGFBP5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGFBP5 nelle cellule tumorali con espressione di IGFBP5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.