Plásmido Doble Nickase (h) IGFBP4: sc-402342-NIC

La proteína 4 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina (IGFBP4) es un modulador secretado de la biodisponibilidad de IGF-I e IGF-II que regula la interacción con el receptor y la señalización subsiguiente de PI3K–AKT y MAPK, dando forma a programas de proliferación, supervivencia y diferenciación celular. Al unirse a los IGF en el medio extracelular, IGFBP4 puede ajustar los gradientes de factores de crecimiento y las respuestas paracrinas/autocrinas en contextos de remodelación tisular, incluidos los microambientes vasculares y estromales. La expresión o el procesamiento alterados de IGFBP4 se han asociado con la desregulación de la señalización de crecimiento observada en fibrosis, disfunción metabólica, remodelado cardiovascular y múltiples fenotipos relacionados con el cáncer. En consecuencia, IGFBP4 se estudia con frecuencia como un regulador dependiente del contexto de la actividad del eje de los IGF y de la dinámica de la señalización extracelular.

IGFBP4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IGFBP4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IGFBP4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IGFBP4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IGFBP4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.