IGFBP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421065

Panoramica

Igfbp4 codifica la proteina 4 legante il fattore di crescita insulino-simile (insulin-like growth factor binding protein 4, IGFBP4), un regolatore secreto della biodisponibilità degli IGF che modula le interazioni di IGF1/IGF2 con i recettori degli IGF e, di conseguenza, influenza la segnalazione a valle delle vie PI3K–AKT e MAPK. Nei tessuti del topo, IGFBP4 contribuisce a modellare proliferazione, sopravvivenza e differenziamento cellulari, nonché la segnalazione del microambiente extracellulare, attraverso il controllo dell’attività locale degli IGF. Alterazioni dell’espressione di IGFBP4 sono state associate a programmi di rimodellamento e infiammazione nei compartimenti vascolare e stromale e a cambiamenti di fenotipi guidati da fattori di crescita, rilevanti per la regolazione metabolica e per i microambienti associati ai tumori. In quanto modulatore dipendente dal contesto della segnalazione mitogenica, Igfbp4 è spesso studiato in ricerche su sviluppo, omeostasi tissutale e meccanismi di malattia che coinvolgono una segnalazione dei fattori di crescita deregolata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Igfbp4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Igfbp4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Igfbp4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IGFBP4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Igfbp4 per lo studio della segnalazione di IGFBP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Igfbp4 critici per la funzione di IGFBP4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Igfbp4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IGFBP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IGFBP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Igfbp4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IGFBP4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IGFBP4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Igfbp4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Igfbp4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.