IGF2BP3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431213-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IGF2BP3 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- IGF2BP3 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal IGF2BP3 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal IGF2BP3 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Igf2bp3. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IGF2BP3 Antibody (D-7): sc-390639
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IGF2BP3 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-431213-ACT | 20 µg | $397.00 |
Igf2bp3 codifica IGF2BP3, una proteina oncofetale legante l’RNA che riconosce trascritti modificati con m6A e modula la stabilità, la localizzazione e la traduzione dell’mRNA. IGF2BP3 influenza programmi di regolazione genica post-trascrizionale che sostengono proliferazione, sopravvivenza e migrazione, intersecandosi con le vie di segnalazione dei fattori di crescita e con i circuiti di controllo del ciclo cellulare. Nei sistemi murini, l’attività di Igf2bp3 viene comunemente studiata in contesti di sviluppo e in modelli di crescita aberrante, in cui si osserva la riattivazione di reti fetali di regolazione dell’RNA. La deregolazione dei reguloni di RNA associati a IGF2BP3 è stata collegata ad alterate transizioni di stato cellulare e a fenotipi invasivi in molteplici contesti di ricerca rilevanti per la malattia.
IGF2BP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Igf2bp3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
IGF2BP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Igf2bp3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Igf2bp3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGF2BP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Igf2bp3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGF2BP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGF2BP3 nelle cellule tumorali con espressione di Igf2bp3 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.