IGF2BP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435664

Panoramica

Igf2bp2 codifica IGF2BP2, una proteina legante l’RNA che riconosce trascritti modificati con N6-metiladenosina (m6A) e modula la stabilità, la localizzazione e la traduzione dell’mRNA. Attraverso il controllo post-trascrizionale dell’espressione genica, IGF2BP2 influenza reti di segnalazione metabolica, incluse le vie dell’insulina/IGF e PI3K–AKT, incidendo così sulla crescita cellulare, sull’omeostasi energetica e sulle risposte allo stress. In modelli murini e negli studi genetici sull’uomo, un’alterata attività di IGF2BP2 è stata associata a fenotipi metabolici quali resistenza all’insulina e suscettibilità al diabete di tipo 2, e un’espressione deregolata è stata riportata anche in contesti proliferativi e infiammatori. Queste caratteristiche rendono IGF2BP2 un nodo utile per studiare le decisioni sul destino dell’RNA e la regolazione dipendente da m6A in stati cellulari rilevanti per il metabolismo e la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IGF2BP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Igf2bp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Igf2bp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Igf2bp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IGF2BP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Igf2bp2 per lo studio della segnalazione di IGF2BP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Igf2bp2 critici per la funzione di IGF2BP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Igf2bp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IGF2BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IGF2BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Igf2bp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IGF2BP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IGF2BP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Igf2bp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Igf2bp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.