IGF-I Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421056-ACT

Il gene murino *Igf1* codifica il fattore di crescita insulino-simile I (IGF-I), un ormone peptidico secreto che integra segnali endocrini e paracrini per regolare la crescita somatica, l’omeostasi del muscolo scheletrico e dell’osso e lo sviluppo neuronale. Il legame di IGF-I con IGF1R attiva le cascate PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, coordinando la sintesi proteica, il metabolismo del glucosio, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di sopravvivenza. Nei modelli sperimentali, un’alterata espressione o segnalazione di *Igf1* è associata a fenotipi di crescita, ridotta rigenerazione tissutale, disregolazione metabolica e cambiamenti nei processi di neurosviluppo e neurodegenerazione. Queste vie di segnalazione interagiscono anche con l’infiammazione e il rimodellamento della matrice extracellulare, rendendo *Igf1* un nodo chiave per studiare una biologia anabolica e di risposta allo stress dipendente dal contesto.

IGF-I Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Igf1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGF-I Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Igf1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Igf1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGF-I. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Igf1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGF-I nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGF-I nelle cellule tumorali con espressione di Igf1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.