IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400084-LAC

IGF1R codifica per il recettore del fattore di crescita insulino-simile 1 (recettore IGF-1 α/β), una tirosin-chinasi recettoriale che lega IGF-1/IGF-2 per regolare la crescita cellulare, la sopravvivenza e il metabolismo. L’autofosforilazione indotta dal ligando attiva a valle le vie di segnalazione PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, integrando segnali mitogenici e anti-apoptotici con la bioenergetica cellulare. La segnalazione di IGF1R influenza la differenziazione, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress tramite proteine adattatrici quali IRS1/2 e SHC. Un’attività deregolata di IGF1R è associata a una segnalazione proliferativa aberrante e a programmi metabolici alterati osservati in diversi contesti di ricerca oncologica e sulle malattie metaboliche.

Le particelle di attivazione lentivirale IGF-1 Receptor α/β/IGF1R (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IGF1R in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IGF-1 Receptor α/β/IGF1R (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IGF1R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IGF-1 Receptor α/β/IGF1R. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IGF1R e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.