IFN-ω Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409162-ACT

IFNW1 codifica l’interferone omega (IFN-ω), un interferone di tipo I che contribuisce alla difesa antivirale innata e alla sorveglianza immunitaria. IFN-ω trasmette il segnale attraverso il complesso recettoriale IFNAR per attivare le vie JAK–STAT e indurre i geni stimolati dagli interferoni (ISG), che regolano la restrizione virale, la presentazione dell’antigene e la modulazione dei programmi infiammatori. La sua attività si interseca con vie di rilevamento degli acidi nucleici come RIG-I/MDA5 e cGAS–STING, che coordinano le risposte trascrizionali all’infezione e allo stress cellulare. Una segnalazione disregolata degli interferoni di tipo I, inclusa un’espressione aberrante di IFN-ω, è rilevante negli studi su infiammazione cronica, autoimmunità e interazioni tra tumore e sistema immunitario, in cui reti geniche guidate dagli interferoni plasmano i fenotipi cellulari.

IFN-omega Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNW1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFN-omega Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNW1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNW1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFN-omega. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNW1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFN-omega nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFN-omega nelle cellule tumorali con espressione di IFNW1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.