IFN-γ/Interferon gamma Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421050-ACT

Il gene murino Ifng codifica l’interferone gamma (IFN-γ), un interferone di tipo II pleiotropico che coordina le risposte immunitarie innate e adattative attivando i macrofagi e indirizzando la polarizzazione dei linfociti T helper 1. L’IFN-γ segnala principalmente attraverso IFNGR1/IFNGR2, attivando JAK1/JAK2 e STAT1 e inducendo geni stimolati dagli interferoni che potenziano l’elaborazione e la presentazione dell’antigene, le difese antimicrobiche e il feedback immunoregolatorio. Questa citochina si interseca con programmi trascrizionali guidati da NF-κB e IRF, influenzando la produzione di chemochine, l’espressione del MHC e gli stati di differenziazione cellulare. Un’attività deregolata dell’IFN-γ è implicata in patologie infiammatorie e autoimmuni, nella suscettibilità dell’ospite ai patogeni, nella sorveglianza immunitaria dei tumori e in processi neuroinfiammatori, rendendo Ifng un nodo centrale per studi di immunologia meccanicistica.

IFN-γ/Interferon gamma Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ifng senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFN-γ/Interferon gamma Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ifng nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ifng, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFN-γ/Interferon gamma. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ifng nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFN-γ/Interferon gamma nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFN-γ/Interferon gamma nelle cellule tumorali con espressione di Ifng silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.