IFN-α/βRβ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403854-ACT

IFNAR2 codifica la subunità 2 del recettore dell’interferone alfa/beta (IFN-α/βRβ), un componente fondamentale del complesso recettoriale dell’interferone di tipo I che media le risposte cellulari a IFN-α e IFN-β. Il legame del ligando attiva una segnalazione dipendente da JAK1/TYK2 e i conseguenti programmi trascrizionali STAT1/STAT2-IRF9 (ISGF3), coordinando la difesa antivirale, la presentazione dell’antigene e la regolazione dell’immunità innata. Le vie dipendenti da IFNAR2 modulano il cross-talk con la segnalazione NF-κB e MAPK e influenzano reti citochiniche che determinano l’attivazione delle cellule immunitarie e l’infiammazione tissutale. Alterazioni dell’espressione di IFNAR2 o della sua capacità di segnalazione sono spesso studiate in contesti di espressione disregolata dei geni stimolati dall’interferone, patologie immunomediate e interazioni immunitarie tumorali.

IFN-α/βRβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNAR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFN-α/βRβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNAR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNAR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFN-α/βRβ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNAR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFN-α/βRβ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFN-α/βRβ nelle cellule tumorali con espressione di IFNAR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.