Plasmide Double Nickase (h) IFITM2: sc-403889-NIC

IFITM2 (protéine transmembranaire 2 induite par l’interféron) est une protéine transmembranaire de type II induite par la signalisation des interférons de type I et de type II, et agit comme un facteur de restriction intrinsèque limitant l’entrée et les premières étapes de réplication de divers virus enveloppés. Elle se localise principalement dans les compartiments endosomaux et à la membrane plasmique, où elle modifie les propriétés et le trafic membranaires afin d’entraver la fusion et l’internalisation virales, l’inscrivant ainsi dans la défense immunitaire innée et les réseaux de gènes stimulés par l’interféron. L’activité d’IFITM2 recoupe des voies impliquées dans l’endocytose, l’organisation des vésicules et la signalisation inflammatoire, et son expression est fréquemment utilisée comme indicateur de l’activation de la voie de l’interféron. Une expression dérégulée d’IFITM2 a été étudiée dans le contexte d’une activation immunitaire aberrante et d’états inflammatoires associés aux infections, ce qui souligne sa pertinence pour les études mécanistiques des interactions hôte–pathogène.

IFITM2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IFITM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IFITM2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IFITM2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IFITM2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.