IFITM2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403889-NIC

IFITM2 (proteina transmembrana 2 indotta dall’interferone) è una proteina transmembrana di tipo II indotta dalla segnalazione dell’interferone di tipo I e di tipo II e funge da fattore di restrizione intrinseco che limita l’ingresso e le fasi iniziali della replicazione di numerosi virus con envelope. Si localizza principalmente in compartimenti endosomiali e nella membrana plasmatica, dove modifica le proprietà e il traffico di membrana per ostacolare la fusione e l’uptake virale, collegandosi così alla difesa immunitaria innata e alle reti di geni stimolati dall’interferone. L’attività di IFITM2 interseca vie che regolano endocitosi, organizzazione delle vescicole e segnalazione infiammatoria, e la sua espressione è spesso utilizzata come indicatore dell’attivazione della via dell’interferone. L’espressione deregolata di IFITM2 è stata studiata nel contesto di un’attivazione immunitaria aberrante e di stati infiammatori associati a infezione, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici delle interazioni ospite–patogeno.

IFITM2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IFITM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IFITM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IFITM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IFITM2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.