IFITM1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416878-LAC

IFITM1 (proteina transmembrana 1 indotta dall’interferone) è un gene stimolato dall’interferone che codifica una piccola proteina associata alla membrana, coinvolta nella difesa antivirale intrinseca. IFITM1 modula le proprietà della membrana cellulare e il traffico endosomiale per limitare l’ingresso e la fusione virale, integrandosi con la segnalazione degli interferoni di tipo I/II e con vie più ampie dell’immunità innata, come i programmi trascrizionali guidati da JAK–STAT. Oltre alle interazioni ospite–patogeno, un’alterata espressione di IFITM1 è stata collegata a stati di attivazione immunitaria e a microambienti infiammatori, con associazioni riportate con la biologia tumorale e il comportamento metastatico in molteplici contesti oncologici. Queste caratteristiche rendono IFITM1 un nodo utile per studiare la responsività all’interferone, l’immunità cellulo-intrinseca e la regolazione dipendente dalla membrana dell’assorbimento dei patogeni.

Le particelle di attivazione lentivirale IFITM1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IFITM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IFITM1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IFITM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IFITM1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IFITM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.