IFIT5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406044-ACT

IFIT5 umano (interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 5) è il prodotto di un gene stimolato dall’interferone che partecipa alla difesa immunitaria innata legando diverse specie di RNA, con una preferenza per l’RNA virale 5′-trifosforilato, e modulando la segnalazione antivirale a valle. IFIT5 contribuisce alle risposte all’interferone di tipo I e modula processi di sorveglianza dell’RNA che influenzano la traduzione cellulare e i programmi di espressione genica infiammatori. Per queste attività, IFIT5 è comunemente studiata nel contesto delle interazioni ospite–patogeno e degli stati guidati dall’interferone, inclusi l’infiammazione cronica e la segnalazione immunitaria associata ai tumori. Un’espressione alterata di IFIT5 è stata collegata a cambiamenti nelle reti di citochine e in fenotipi del metabolismo dell’RNA rilevanti per studi meccanicistici della disregolazione immunitaria.

IFIT5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFIT5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFIT5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFIT5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFIT5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFIT5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFIT5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFIT5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFIT5 nelle cellule tumorali con espressione di IFIT5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.