IFI-27 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416981-LAC

IFI27 codifica la proteina 27 inducibile dall’interferone alfa (IFI-27), un piccolo prodotto genico stimolato dall’interferone, associato alla segnalazione dell’interferone di tipo I e alle risposte immunitarie innate. L’espressione di IFI-27 viene indotta a valle dell’attivazione di JAK–STAT ed è spesso utilizzata come readout molecolare dell’attività dell’interferone in contesti immunitari ed epiteliali. A livello cellulare, IFI-27 è stata associata a processi mitocondriali e di membrana, alla suscettibilità all’apoptosi e alla modulazione degli stati antivirali, con effetti sulla sopravvivenza cellulare dipendenti dal contesto. Un’espressione deregolata di IFI27 è stata riportata in condizioni infiammatorie, nelle firme trascrizionali di infezioni virali e in molteplici dataset trascrittomici di tumori, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici mirati alle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale IFI-27 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IFI27 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IFI-27 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IFI27, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IFI-27. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IFI27 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.