IEX-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403107-ACT

L’IER3 umano codifica la proteina a risposta immediata IEX-1, un regolatore inducibile dallo stress che integra i segnali infiammatori e dei fattori di crescita con le decisioni di sopravvivenza cellulare. IEX-1 modula apoptosi e proliferazione attraverso vie che includono NF-κB, MAPK/ERK e risposte associate a p53, ed è stata collegata all’omeostasi mitocondriale e al controllo delle specie reattive dell’ossigeno (ROS). Un’espressione alterata di IER3/IEX-1 è stata riportata in contesti di infiammazione cronica, rimodellamento vascolare e molteplici tumori, dove può influenzare l’adattamento allo stress e programmi trascrizionali correlati all’immunità. Queste proprietà rendono IER3 un nodo utile per studiare la regolazione genica responsiva agli stimoli, la segnalazione dello stress ossidativo e gli esiti del destino cellulare dipendenti dal contesto.

IEX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IER3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IEX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IER3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IER3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IEX-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IER3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IEX-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IEX-1 nelle cellule tumorali con espressione di IER3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.