IDH2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401417-NIC

IDH2 codifica l’isocitrato deidrogenasi mitocondriale NADP-dipendente, che catalizza la decarbossilazione ossidativa dell’isocitrato ad α-chetoglutarato producendo NADPH. Questa reazione sostiene il ciclo dell’acido tricarbossilico, l’omeostasi redox mitocondriale e le difese antiossidanti mantenendo attive le vie del glutatione e della tioredossina dipendenti da NADPH. L’attività di IDH2 influenza i programmi di differenziamento cellulare e l’adattamento metabolico in condizioni di stress ossidativo, e la deregolazione della funzione di IDH2 è collegata ad alterazioni del metabolismo dell’α-chetoglutarato e della regolazione epigenetica. Mutazioni ricorrenti di IDH2 che generano l’oncometabolita 2-idrossiglutarato sono associate a pattern aberranti di metilazione di DNA e istoni, rendendo IDH2 un nodo chiave negli studi sul metabolismo del cancro e sulla segnalazione mitocondriale.

IDH2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IDH2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IDH2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IDH2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IDH2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.